پرسشنامه شخصیتی 16 عاملی کتل
دانلود جزوه آموزشی رشته مکانیک رفع عیوب موتور خودرو با فرمت ورد و قابل ویرایش تعداد صفحات 36
دانلود جزوه آماده
عیب یابی :
پیش از آغاز کار باید ، دست کم ، نظریه ای قابل قبول در مورد ماهیت مسئله داشته باشید . با استفاده از فنون عیب یابی می توان فهمید که آیا تعمیر مهمی در پیش است یا نه . هر گاه عیب یابی با تجزیة روغن همراه شود مشخص میشود که کدام دسته از قطعات ـ رینگها ، یاتاقان ها و غیره ـ به سرعت در حال ساییده شدن هستند .
داده های حاصل از آزمون و تحلیل ، همراه با تاریخچة تفصیلی بهره برداری ، باید محل عیب را به خوبی مشخص کنند ( سیلندر ها ، یاتاقان ها ، محرک های لوازم کمکی و مانند آن ) . اما تحلیل نیابد صرفاً به نتیجه گیری کلی ختم شود . مثلاً بی معناست اگر بگوییم که یاتاقان یا رینگ پیستون « ساییده است » یا «سوخته است » تعمییر کار باید تشخیص دهد که خرابی کدام قطعه یا کدام وضعیت بهره برداری خاص سبب خرابی این قطعات شده است . بلبرینگ چرخ اتوبوسهای شهری نمونة خوبی از فرایند انتخاب شده است : تجربه نشان می دهد که بلبرینگ های سمت راست جلو ، بیشتر از بلبرینگ های سمت چپ خراب می شوند . وجود ذرات اکسید سرخ رنگ در والوالین حاکی از آن است که بلبرینگ بر اثر نفوذ رطوبت ( یعنی ترشح آب ) خراب شده است و طبیعی است که احتمال ترشح آب در طرفی ازاتوبوس که به جدول منار خیابان نزدیک است بیشتر است .وقتی تعمیر کار مکانیسم خرابی را دریافت ، می تواند با نگهداری بهتر و منظمتر ، ارتقای کیفیت قطعات ، یا اصلاح شرایط بهره برداری ، مشکل را بر طرف کند .
فرمت فایل : WORD (قابل ویرایش)
تعداد صفحات:90
پایاننامه برای دریافت درجه کارشناسی ارشد زیست شناسی
گرایش ژنتیک
فهرست مطالب:
چکیده .....................................................................................................................................................................................................1
فصل اول: کلیات تحقیق
1-1-.اپیدمیولوژی سرطان معده........................................................................................................................................................2
1-2- معده...............................................................................................................................................................................................3
1-2-1- کاردیا.....................................................................................................................................................................................4
1-2-2- طاق و تنه.............................................................................................................................................................................4
1-2-3- پیلور.......................................................................................................................................................................................5
1-3- سلول های موجود در غدد معده.............................................................................................................................................5
1-3-1- سلول های گردن مخاط....................................................................................................................................................5
1-3-2- سلول های تمایز نیافته.....................................................................................................................................................6
1-3-3- سلول های اصلی.................................................................................................................................................................6
1-3-4- سلول های کناری یا جداری ...........................................................................................................................................6
1-3-5- سلول های غدد درون ریز ................................................................................................................................................7
1-4- انواع سرطان معده.......................................................................................................................................................................7
1-4-1- آدنوکارسینوم نوع روده ای................................................................................................................................................7
1-4-2- آدنوکارسینوم نوع منتشر...................................................................................................................................................8
1-5- اتیولوژی سرطان معده................................................................................................................................................................9
1-5-1 هلیکوباکتر پیلوری.................................................................................................................................................................9
1 -5-2- رژیم غذایی........................................................................................................................................................................10
1 -5-3- سیگار.................................................................................................................................................................................10
1-5-4- فاکتورهای ژنتیکی............................................................................................................................................................11
1-6- مخاط معده..................................................................................................................................................................................12
1-7- موکوس معده..............................................................................................................................................................................12
1-8- پروتئین های گاستروکین .......................................................................................................................................................13
1-8-1- ژن GKN1 .........................................................................................................................................................................15
1-8-2-نقش GKN1 در معده و سرطان معده..........................................................................................................................16
1-9- ارتباط پلی مورفیسمهای ژنتیکی با خطر ابتلا به سرطان...............................................................................................18
1-10- اهداف تحقیق.........................................................................................................................................................................20
فصل دوم:پیشینه تحقیق
فصل سوم:مواد و روش ها
3-1- وسایل و مواد مورد استفاده در این مطالعه..........................................................................................................................24
3-2- نوع مطالعه...................................................................................................................................................................................26
3-3- جامعه آماری و نمونه گیری................................................................................................................................. ..................26
3-4- رضایت نامه..................................................................................................................................................................................27
3-5- روش تهیه محلولهای مورد نیاز جهت انجام الکتروفورز..................................................................................................27
3-5-1-روش تهیه بافر الکتروفورز TBE در حجم 500 میلی لیتر.........................................................................................27
3-5-2- محلول رنگ آمیزی DNA Stain ..................................................................................................................................28
3-6- استخراج DNA از خون.............................................................................................................................................................28
3-7- تهیه ژل آگارز و الکتروفورز.......................................................................................................................................................29
3-8- طراحی پرایمر..............................................................................................................................................................................30
3-9- تکثیر ناحیه پروموتری ژن GKN1....................................................................................................................................... 31
3-10- توالی یابی...................................................................................................................................................................................35
3-11- شناسایی SNPهای پروموتر ژن GKN1 ............................................................................................................................35
3-12- تکنیک Tetra Primer ARMS- PCR................................................................................................................................35
3-13- تعیین ژنوتیپ SNP با شناسه های rs4575760 و rs4072127 با روش Tetra- primer ARMS PCR............37
3-14- آنالیز آماری...............................................................................................................................................................................42
پرسشنامه.................................................................................................................................................................................................43
فصل چهارم-نتایج
4-1- مشخصات جمعیت مورد مطالعه..........................................................................................................................................44
4-2- بررسی ارتباط فاکتورهای خطر با سرطان معده................................................................................................................47
4-2-1- عفونت هلیکوباکتر پیلوری............................................................................................................................................47
4-2-2- مصرف الکل.......................................................................................................................................................................48
4-2-3- ازدواج فامیلی والدین......................................................................................................................................................49
4-2-4- سابقه سرطان در خانواذه...............................................................................................................................................51
4-3- بررسی کیفیت DNA استخراج شده...................................................................................................................................51
4-4- تکثیر ناحیه پروموتری ژن GKN1......................................................................................................................................52
4-5- شناساییSNP های ناحیه پروموتری ژن GKN1............................................................................................................53
4-6- تعیین ژنوتیپ SNPبا شناسههای rs4575760 وrs4072127 با تکنیک Tetra Primer ARMS- PCR.........55
4-7- بررسی ارتباط پلی مورفیسم rs 4575760 ژنGKN1 با خطر ابتلا به سرطان معده..............................................58
4-8- بررسی ارتباط پلی مورفیسم rs 4072127 ژن GKN1 با خطر ابتلا به سرطان معده..............................................58
4-9- بررسی ارتباط پلی مورفیسمهای ژنGKN1 با نوع تومور............................................................................................60
فصل پنجم-بحث و نتیجه گیری
5-1- عوامل موثر در ابتلا به سرطان معده.................................................................................................................................62
5-1-1- بررسی نتایج حاصل از اثر عفونت هلیکوباکتر پیلوری بر ابتلا به سرطان معده.................................................63
5-1-2- بررسی نتایج حاصل از تاثیر الکل با خطر ابتلا به سرطان معده...........................................................................63
5-1-3- سابقه سرطان در خانواده (اقوام درجه یک).............................................................................................................64
5-1-4- نتایج حاصل از بررسی ارتباط پلی مورفیسمهای تک نوکلئوتیدی پروموتر ژن GKN1 با خطر ابتلا به سرطان
معده......................................................................................................................................................................................................65
پیشنهادات.............................................................................................................................................................................................67
رفرنس....................................................................................................................................................................................................68
چکیده خارجی.....................................................................................................................................................................................78
فهرست شکل ها
شکل 1-1-قسمتهای مختلف معده...............................................................................................................................................4
شکل 1- 2- ترکیبات تشکیل دهنده موکوس.............................................................................................................................12
شکل1 - 3- ساختار فضایی پروتئین های گاستروکین.............................................................................................................14
شکل 1-4- بیان GKNS، TFFS و موسینها در اپیتلیوم معده موش.....................................................................................14
شکل 1-5- جایگاه ژنهای GKN1، GKN2 و GKN3 بر روی کروموزوم 2 انسان...........................................................15
شکل 1-6- موقعیت 38CYS در 3 ژنGKN1، GKN2 و GKN3.......................................................................................16
شکل 3-1: نمایی از تکنیک Tetra Primer ARMS- PCR....................................................................................................36
شکل 4-1: الکتروفورز DNA استخراج شده بر روی ژل آگارز 1 درصد. .............................................................................51
شکل 4-2: تکثیر بخشی از ناحیه پروموتری ژن GKN1 (GKN1A)................................................................................52
شکل 4-3: تکثیر بخشی از ناحیه پروموتری ژن GKN1 (GKN1B)...................................................................................53
شکل 4-4 : مقایسه توالی ناحیه پروموتر ژن GKN1 با نرم افزار SeqMan ........................................................................54
شکل 4-5: ژنوتیپهای مختلف در SNP rs 4557760 در پروموتر ژن GKN1.................................................................54
شکل4-6 :ژنوتیپهای مختلف در SNP 72127 rs 40 در پروموتر ژن GKN1 ................................................................55
شکل4-7: تعیین ژنوتیپ SNP با شناسه 4557760 rs ژن GKN1 با تکنیک Tetra Primer ARMS- PCR...........56
شکل4- 8: تعیین ژنوتیپ SNP با شناسه 4072127 rsژن GKN1 با تکنیک .Tetra Primer ARMS- PCR.........57
شکل 5-1: نواحی پروموتری ژنهای GKN2، TFF1، TFF2 و TFF3 و فاکتورهای رونویسی مربوط به این ژنها....67
فهرست جداول
جدول 1-1- خلاصه ای از پلی مورفیسمهایی که با انواع منتشر و روده ای سرطان معده در ارتباط هستند...............19
جدول 3-1- توالی پرایمرهای GKN1A و GKN1B...................................................................................................................32
جدول 3-2- شرایط PCR جهت تکثیر ناحیه پروموتری ژن GKN1 (GKN1A و GKN1B ).........................................33
جدول 3-3- میزان مواد مورد نیاز PCR جهت تکثیر ناحیه پروموتری ژن GKN1.............................................................34
جدول 3-5- توالی پرایمرهای مورد استفاده در Tetra- primer ARMS PCR برای تعیین ژنوتیپ rs4575760........37
جدول 3-6- توالی پرایمرهای مورد استفاده در Tetra- primer ARMS PCR برای تعیین ژنوتیپ rs4072127........38
جدول 3-7- مواد و حجم مورد نیاز برای انجام Tetra- primer ARMS PCR برای تعیین ژنوتیپrs 4575760 ......39 جدول 3-8- مواد و حجم مورد نیاز برای انجام Tetra- primer ARMS PCR برای تعیین ژنوتیپ rs 4072127 ....40 جدول3-9- شرایط PCR برای تعیین ژنوتیپ rs4575760................................... ................................41 جدول3-10- شرایط PCR برای تعیین ژنوتیپ rs4072127...................................................................................................41 جدول4-1: مشخصات نمونههای جمعیت A...............................................................................................................................45
جدول4-2: مشخصات نمونههای جمعیت B...............................................................................................................................46
جدول 4-3: ژنوتیپ نمونههای بیمار و شاهد پلیمورفیسم rs 4557760 ............................................................................59
جدول 4-4: ژنوتیپ نمونههای بیمار و شاهد پلی مورفیسم rs 4072127 ..........................................................................59
فهرست نمودارها
نمودار4-1- فراوانی سرطان های Intestinal (19 نفر)و diffuse (12 نفر) در بیماران آلوده به هلیکوباکتر پیلوری در
جمعیت A............................................................................................................................................................................................47
نمودار 4-2- فراوانی سرطان های Intestinal (17 نفر) و diffuse (11 نفر) در مبتلایان به هلیکوباکتر پیلوریدر
جمعیت B...........................................................................................................................................................................................48
نمودار4-3: فراوانی افراد الکلی و غیر الکلی در گروه بیمار و شاهد در جمعیت A............................................................49
نمودار 4-4: فراوانی افراد الکلی و غیر الکلی در گروه بیمار و شاهد در جمعیتB ..........................................................49
نمودار 4-5: فراوانی ازدواج فامیلی و غیر فامیلی والدین در گروه بیمار و شاهد جمعیت A..........................................50
نمودار 4-6: فراوانی ازدواج فامیلی و غیر فامیلی والدین در گروه بیمار و شاهد جمعیت B.........................................50
چکیده
مقدمه: سرطان معده شایع ترین سرطان در کشورهای آسیایی محسوب میشود و در ایران نیز به عنوان شایع ترین و اولین علت مرگ و میر به دلیل سرطان در میان مردان و دومین علت مرگ و میر در میان زنان است. یکی از عواملی که با سرطان معده ارتباط دارد، تغییر در ترکیب موکوس معده است که سطح اپیتلیال معده را پوشانده است. هدف: یکی از فراوان ترین پروتئینهای موجود در موکوس معده گاستروکین 1 است که توسط ژن GKN1 در انسان کد میشود. این پروتئین در عملکرد طبیعی معده مثل تمایز طبیعی سلولهای اپیتلیال معده، یکپارچگی مخاط و ترمیم سلولهای اپیتلیال معده پس از آسیب نقش مهمی ایفا می کند. بیان ژن GKN1 در سرطان معده کاهش می یابد و از این ژن به عنوان ژن سرکوب کننده تومور در معده نام برده می شود.
مواد و روش ها: با توجه به نقش مهم گاستروکین 1 در اپیتلیوم معده و کاهش بیان ژن GKN1 در سرطان معده و نقش تنظیمی پروموتر در بیان ژن ها، در این مطالعه 52 بیمار مبتلا به سرطان معده و 52 فرد سالم انتخاب شده و پلی مورفیسمهای تک نوکلئوتیدی قرار گرفته در ناحیه پروموتری ژن GKN1 با استفاده از توالی یابی و تکنیک Tetra-primer ARMS PCR بررسی گردید.
نتیجه گیری: نتایج نشان داد که پلیمورفیسم تک نوکلئوتیدی rs 4575760 با خطر ابتلا به سرطان معده ارتباط دارد (032/0=P , 1=df ,9/0-1/0 =%95CI ,42/0=OR). اما پلی مورفیسم تک نوکلئوتیدی rs 4072127 با خطر ابتلا به سرطان معده ارتباط ندارد ( 13/0 =P , 1 =df , 52/4 - 8/0=%95CI , 919/1 =OR).
کلمات کلیدی: سرطان معده، ژن GKN1، پروموتر، پلیمورفیسم تک نوکلئوتیدی، Tetra-primer ARMS- PCR.
دانلود کنش پژوهی تأثیر الگوهای تدریس معلم بر یادگیری دانشآموزان با فرمت ورد و قابل ویرایش تعدادصفحات40
مقدمه< ...
فرمت فایل : WORD (قابل ویرایش)
تعداد صفحات:131
پایان نامه برای دریافت درجه کارشناسی ارشد ((M.Sc))
گرایش: سلولی-مولکولی
فهرست مطالب:
عنوان صفحه
خلاصه فارسی............................................................................................................................................................1
فصل اول: کلیات
مقدمه ..........................................................................................................................................................................2
1-1- بیان مسئله......................................................................................................................................................4
1- 2 -اهداف پژوهش..............................................................................................................................................5
1-3- ضروریت انجام تحقیق..................................................................................................................................6
1-4- تولید جنین در شرایط in vivo
1-4-1- روند ایجاد سلول جنسی ماده.......................................................................................................6
1-4-1-1- ویژگی¬های اووسیت ثانویه...................................................................................................................8
1-4-2- روند ایجاد سلول جنسی نر......................................................................................................................9
1-4-3- لقاح.............................................................................................................................................................10
1-4-4- تسهیم........................................................................................................................................................12
1-5- تولید جنین در شرایط in vitro
1-5-1- بلوغ آزمایشگاهی تخمک (IVM).......................................................................................................15
1-5-2- ظرفیت پذیری اسپرم..............................................................................................................................19
1-5-3- لقاح در شرایط آزمایشگاهی(IVF).....................................................................................................21
1-5-4-کشت جنین در شرایط آزمایشگاهی(IVC).......................................................................................23
1-6- مقایسه جنین¬های طبیعی با جنین¬های آزمایشگاهی............................................................................26
1-7- انجماد
1-7-1- مراحل اصلی انجماد................................................................................................................................30
1-7-2- راه¬های کاهش اثرات زیانبار مواد محافظت کننده.............................................................................30
1-7-3- روش¬های انجماد......................................................................................................................................30
1-7-3-1- انجماد شیشه-ای..................................................................................................................................31
1-7-3-1-1- عوامل تکنیکی موثر در انجماد شیشه-ای..................................................................................32
1-7-3-1-1-1- زمان تعادل و آبگیری..............................................................................................................32
1-7-3-1-1-2- سرعت سرد کردن....................................................................................................................32
1-7-3-1-1-3- سرعت گرم کردن.....................................................................................................................35
1-7-3-1-1-4- مواد محافظ انجمادی...............................................................................................................35
1-7-3-1-1-5- نقش ضد یخ-ها...........................................................................................................................36
1-7-3-1-1-6- ذوب و آبدهی............................................................................................................................. 36
1-8- آلدوسترون.......................................................................................................................................................37
1-8-1- خصوصیات.................................................................................................................................................37
1-8-2- عملکرد.......................................................................................................................................................38
1-9- ارزیابی کیفیت رویان....................................................................................................................................41
1-10- سلول¬های رویانی........................................................................................................................................43
فصل دوم: مروری بر متون گذشته
2-1- اثرات انجماد بر روی تخمک.......................................................................................................................46
2-2- اثر روش انجماد شیشه-ای............................................................................................................................47
2-3- بیان زیر واحد¬های پمپ Na/K ATpase در تخمک و جنین.........................................................48
2-4- پمپ Na/K ATpase ...........................................................................................................................49
2-5- آکواپورین-ها....................................................................................................................................................51
2-6- هچ یا تفریخ....................................................................................................................................................52
2-7- فعال شدن ژنوم رویانی................................................................................................................................55
2-8- متابولیسم رویان............................................................................................................................................56
2-9- نقش آلدوسترون در بیان پروتیین Na/K ATpase..........................................................................58
فصل سوم: مواد و روش¬ها
3-1- تولید جنین های حاصل از لقاح خارج رحمی (IVF)
3-1-1- جمعآوری تخمدانها از کشتارگاه و استحصال تخمکها از مایع فولیکولی.................................61
3-1-2- بلوغ آزمایشگاهی تخمکها (IVM)………………..……....…….………………………………………..62
3-1-3- لقاح داخل آزمایشگاهی (IVF)...........................................................................................................63
3-1-3-1- آماده سازی اووسیت¬های بالغ شده برای لقاح...............................................................................63
3-1-3-2- آماده سازی اسپرم..............................................................................................................................63
3-1-4- کشت داخل آزمایشگاهی جنین های حاصل از(IVF)...................................................................64
3-1-5- تازه کردن محیط کشت جنینها..........................................................................................................65
3-2- تهیه محلولهای انجمادی...........................................................................................................................65
3-3- مراحل انجام روند انجماد شیشه ای..........................................................................................................66
3-4- محیط ذوب.....................................................................................................................................................66
3-5- گروه¬های آزمایشی و طراحی مطالعه.........................................................................................................66
3-6- ارزیابی جنینها
3-6-1- ارزیابی کیفی جنینها با استفاده از رنگآمیزی افتراقی...................................................................68
3-7- ایمونوسایتوشیمی پروتئین¬های سطحی جنین های گوسفندی(Sheep embryo ICC)........70
فصل چهارم: نتایج
4-1- تخمک¬های منجمد شده
4-1-1- گروه آزمایشی اول، افزودن آلدوسترون به محیط IVM تخمک¬های
منجمد-ذوب شده در مرحله GV.........................................................................................................................82
4-1-2- گروه آزمایشی دوم، افزودن آلدوسترون در روز چهارم
جنینی (D4)، به محیط کشت جنین¬های حاصل از تخمک¬های منجمد-ذوب شده..................................82
4-1-3- گروه آزمایشی سوم، افزودن آلدوسترون در طی IVM،
ومتعاقباً انجماد تخمک ها در مرحله MII...........................................................................................................83
4-1-4- گروه آزمایشی چهارم، یا گروه کننرل..................................................................................................83
4-2- تخمک های منجمد نشده
4-2-1- گروه آزمایشی پنجم، افزودن آلدوسترون به محیط IVM تخمک¬های غیر منجمد...................85
4-2-2- گروه آزمایشی ششم، افزودن آلدوسترون در روز چهارم جنینی (D4)، به محیط کشت جنین-های حاصل از تخمک¬های غیر منجمد................................................................................................................85
4-2-3- گروه آزمایشی هفتم، یا گروه کنترل....................................................................................................86
4-3-
فصل پنجم: بحث و پیشنهادات
بحث.............................................................................................................................................................................89
نتیجه¬گیری 94
پیشنهادات 95
منابع 96
خلاصه انگلیسی..................................................................................................................................................113
فهرست جداول
عنوان صفحه
جدول 3-1- ترکیبات محیط HEPES buffered M199 73
جدول 3-2- ترکیبات محیط Bicarbonate buffered M199 73
جدول 3-3- ترکیبات محیطIVF medium “Fert. TALP” 74
جدول 3-4- ترکیبات محیطRinsing medium “R. TALP” 74
جدول 3-5- ترکیبات محیط Sperm medium “S. TALP” 75
جدول 3-6- ترکیبات محیط H-SOF 75
جدول 3-7- ترکیبات محیطی IVC- SOF 76
جدول 3-8- Medium A 76
جدول 3-9- مواد شیمیایی و تجهیزات 77
جدول 4-1- حضور آلدوسترون در محیط کشت در زمانIVM یا روز چهارم
کشت جنینی، در تکامل جنین حاصل از تخمک های منجمد-ذوب شده......................................................83
جدول 4-2- حضور آلدوسترون در محیط کشت در زمانIVM یا روز چهارم
کشت جنینی، در تکامل جنین حاصل از تخمک های تازه 86
جدول 4-3- حضور آلدوسترون در محیط کشت در زمانIVM یا روز چهارم
کشت جنینی و تأثیر آن بر تعدا سلول های در تعدادی از سلول¬های بلاستوسیست در تقسیم جنین¬های حاصل از تخمک¬های تازه 86
فهرست نمودارها
عنوان صفحه
نمودار 4-1- تاثیر آلدسترون روی بیان زیرواحد های α1 و β1 پمپ ATPase سدیم
و پتاسیم در مدت IVM یا IVC – روز چهارم- در محیط کشت سلولهای
بلاستوسیت. نوارها با حروف مختلف نشان دهنده تفاوت معنی¬دار می¬باشد 87
فهرست اشکال
عنوان صفحه
شکل 1-1- روند انجام اووژنزیزیس و اسپرماتوژنزیس 10
شکل 1-2- روند انجام لقاح از زمان رشد تخمک 11
شکل 1-3- تصاویر شماتیک مراحل نفوذ اسپرم به داخل تخمک 21
شکل 1- 4- تصویر شماتیک روند تکامل جنین 24
شکل 1-5- دو مکانیسم عملکرد مولکولی آلدوسترون 38
شکل 1- 6- سیگنال های آلدوسترون 39
شکل 1-7- میزان اتصال سلول – سلول در توده سلولی رویان 44
شکل 2-1- اتصالات سلولی در رویان در حال تقسیم ونقش آنها در تشکیل حفره
بلاستوسل و تعیین موقعیت سلول¬های ترفکتودرم و توده داخلی 50
شکل2-2- فرایند تشکیل حفره بلاستوسل 51
شکل2-3- ساز وکار کنترل فرایند هچ شدن بلاستوسیست 53
شکل 2-4- پدیدۀ فعال شدن ژنوم رویانی 56
شکل 3-1- رنگ آمیزی افتراقی بلاستوسیت های مشتق از تخمک های منجمد 69
شکل 3-2- رنگ آمیزی ایمونوسیتوشیمی زیر واحد های α1 و β1 پمپ Na+/K+ ATPase 72
شکل 4-1- تصاویر مورولا و بلاستوسیست تولید شده در آزمایشگاه
جنین شناسی پژوهشگاه ابن سینا 84
شکل 4-2- تصاویر بلاستوسیست های در حال تفریخ در آزمایشگاه
جنین شناسی پژوهشگاه ابن سینا 84
چکیده
هدف: هدف از این مطالعه بررسی تآثیر آلدوسترون در افزایش توانمندی تکاملی تخمک های منجمد شده گوسفند با افزودن آلدوسترون در مرحله بلوغ تخمک و مرحله کشت جنینی می باشد.
مواد و روش ها: تخمک های حاصل از تخمدان های کشتارگاهی، بطور تصادفی به شش گروه آزمایشی تقسیم شدند: گروه های یک و دو: بلوغ تخمک های (IVM) منجمد شده و تازه در حضور آلدسترون و متعاقباً لقاح آزمایشگاهی تخمک ها (IVF) و کشت جنین های حاصله (IVC) (به ترتیب گروه هایVit-IVM و IVM). گروه های سه و چهار: IVM و IVF تخمک های منجمد شده و تازه، و متعاقباً IVC جنین های حاصله در حضور آلدوسترون در روز چهارم (D4) کشت جنینی (به ترتیب گروه های Vit-D4 و D4). گروه های پنجم و ششم: IVM، IVF و IVC تخمک های منجمد شده ( Vit-Cont) و تازه (Fresh-Cont) بدون حضور آلدوسترون. جنین ها در مراحل مورولا و بلاستوسیت، توسط آنتی بادی های اولیه بر علیه زیر واحدهایα1 و β1 پمپ Na+/K+/ATPase رنگ آمیزی ایمونوسیتوشیمی شدند.
نتایج: میزان تفریخ در گروه هایی که در IVM و یا IVC آنها آلدوسترون افزوده شده بود، در هر دو گروه تخمک های منجمد شده و تازه (به ترتیب گروه های Vit-IVM، IVM، Vit-D4 و D4) در مقایسه با گروه های کنترل (به ترتیب Vit-Cont. و Fresh-Cont.) به طور معنی داری بیشتر بود. میزان بیان تحت واحد β1 پمپ Na+/K+/ATPase، در گروه های Vit-D4 و D4 به طور معنی داری بیشتر از سایر گروه های بود. همچنین نسبت ICM/Total نیز به طور معنی داری در گروه IVM بیشتر از سایر گروه ها بود.
بحث: به طور خلاصه، اضافه نمودن آلدسترون به محیط های کشت IVM و IVC می تواند موجب افزایش معنی دار میزان تفریخ در هر دو گروه تخمک های منجمد شده و تازه گردد. این افزایش میزان تفریخ ممکن است با میزان بیان بیشتر زیر واحد β1 پمپ Na+/K+/ATPase، که احتمالاً توسط افزودن آلدوسترون به محیط کشت القا گردیده است، در ارتباط باشد.
کلید واژه: آلدوسترون، گوسفند، جنین، تکامل، Na+/K+/ATPase، بیان
مقدمه و معرفی طرح
در سال¬های اخیرعلل مختلفی از قبیل بالا رفتن سن ازدواج، تعییر شیوه زندگی، عوامل عفونی و شیمیایی، اشعه و شیمی درمانی، مسائل ژنتیکی و یائسگی زود رس منجر به ناباروری زوج¬های بسیاری شده و لذا انجماد و نگهداری تخمک اقدام اساسی در حفظ قدرت باروری و درمان ناباروری به شمار می¬رود. با توجه به ضرورت حفظ و نگهداری تخمک در روش¬های کمک باروری (ART) تلاش¬های زیادی جهت انجماد و نگهداری تخمک¬ها صورت گرفته است، لیکن تا¬کنون روش قابل اعتمادی در انجماد تخمک که بتواند میزان بالایی از زنده مانی تخمک¬ها را نشان دهد گزارش نشده است. علی رغم بررسی های متعدد صورت گرفته بر روی تغییرات مورفولوژیک، فراساختاری، فیزیولوژیک و عملکردی تخمک های منجمد- ذوب شده، هنوز اطلاعات اندکی در خصوص وقوع تغییرات ملکولی و بیوشیمیایی ¬ایجاد شده در تخمک های مذکور و نیز الگوی بیان پروتیین های مرتبط با توان تکاملی تخمک ها پس از لقاح، به چشم می خورد. با توجه به مطرح بودن این گونه حیوانی به عنوان حیوان مدل انسان برای مطالعات تخمدان و تخمک، خطر انقراض برخی از نژادهای این گونه جانوری، اهمیت این گونه حیوانی از نظر اقتصادی (فراورده های دامی)، نقش آن به عنوان بیوراکتور در مطالعات مرتبط با تولید حیوان تراریخته و نیز عدم انجام مطالعه ای در خصوص بررسی ارتباط بین تجویز آلدوسترون و وضعیت بیان آنزیم Na+/K+/ATPase در روند تشکیل بلاستوسیست، در مطالعه حاضر به بررسی تاثیرآلدوسترون در بهبود کیفی تخمک های منجمد شده پرداخته خواهد شد.
بدین منظور تخمک های استحصال شده از تخمدان های کشتارگاهی گوسفند، در مرحله GV از تقسیمات میوزی به روش کرایوتاپ و با استفاده از روش انجماد شیشه ای منجمد و پس از گذشت یک هفته ذوب شده و پس از لقاح، مراحل تکاملی آنها در شرایط آزمایشگاهی مورد بررسی قرار می گیرد.