پروژه ارزیابی میزان تولید داروی دسفرال از سویه استرپتومایسس پیلوسوس به روش بیولوژیک. doc

اختصاصی از هایدی پروژه ارزیابی میزان تولید داروی دسفرال از سویه استرپتومایسس پیلوسوس به روش بیولوژیک. doc دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

نوع فایل: word

قابل ویرایش 158 صفحه

چکیده:

دسفری اکسامین B،‌ تنها سیدروفوری است که فرم مزتیله آن (نمک متان سولفونات دسفری اکسامین B) با نام تجاری دسفرال جهت درمان بیماران تالاسمی، به منظور شلاته کردن بار اضافی آهن، استفاده می گردد.

به همین منظور جهت تولید دسفری اکسامین B، از سویه استرپتومایسس پیلوسوس استفاده گردید و سویه مربوطه در محیط کشت Soy bean کشت داده شد و دسفری اکسامین آن بوسیله استفاده از محلول فنل- کلروفرم و اتر استخراج گردید. به منظور طراحی این سیستم بیولوژیکی و افزایش بهره برداری از محصول مذکور از منابع کربن و نیتروژن مختلف استفاده گردید و تاثیر هر یک بر میزان دسفری اکسامین تولیدی بررسی شد. چنانچه مشاهده گردید که اسید آمینه ترئونین، افزایش قابل ملاحظه ای بر دسفری اکسامین تولیدی از سویه مذکور دارد و مقدار %125/0 ترئونین، در محیط کشت Soy bean، بسیار مطلوب می باشد. از طرفی اثر ویتامین تیامین (B1)بررسی گردید و مشاهده شد که تاثیر مثبت بر دسفر اکسامین تولیدی دارد و در رده بعد از اسید آمینه ترئونین قرار می گیرد. همچنین اثر اسید آمینه لوسین نیز بر تولید دسفری اکسامین مثبت بوده و در رده بعد از ویتامین تیامین (B1) قرار می گیرد.

در ایـن تحقـیق از شلاته کننـده های کاتیونی EDTA، 8-hydroxyquinolineدر محـیط کشت Soy bean استفاده شد و مشاهده گردید که شلاته کننده های مذکور اثر منفی بر تولید دسفری اکسامیندارند در نتیجه، کاتیونها، اثر مثبت بر افزایش میزان دسفری اکسامین تولیدی خواهند داشت به همین منظور مواد معدنی مختلف از جمله اثر

1. 2H2O,MgSO4.7H2O,ZnSO4.7H2O, MnCl2, FeSO4.7H2O

و همچنیناثرCaCl2.2H2O,MgSO4.7H2O به طور همزمان در محیط کشت Soy bean بررسی گردید.

در این تحقیق نتایج مطلوبی بدست آمد، بطوری که کلسیم (بصورت CaCl2.2H2O) اثر قابل ملاحظه‌ای بر افزایش میزان دسفری اکسامین تولیدی از سویه مذکور دارد و مقدار8/2، و2، CaCl2.2H2O سبب افزایش قابل توجهی بر میزان محصول مذکور می گردد. و بدین ترتیب تاثیر مثبت کلسیم، بر تولید دسفری اکسامین مشخص گردید.

در این آزمایشات تاثیر مثبت روی، منیزیم و منگنز بر دسفری اکسامین تولیدی آشکار گردید بطوری که غلظت 2-10 × 4/0، ZnSO4.7H2O و 6/0، MgSO4.7H2O و 2، MnCl2 سبب افزایش تولید دسفری اکسامین شد.

از طرفی استفاده همزمان CaCl2.2H2O,MgSO4.7H2O در محیط کشت Soy bean اثر منفی بر تولید دسفری اکسامین را نشان داد.

همچنین بررسی ها در مورد آهن (بصورت FeSO4.7H2O)‌ نشان داد که افزایش غلظت آهن، سبب کاهش میزان دسفری اکسامین تولیدی گردید.

و اینگونه با استفاده از منابع نیتروژن و مواد معدنی مختلف بهینه سازی محیط کشت انجام گرفت و تولید دسفری اکسامین از سویه استرپتومایسس پیلوسوس به میزان قابل ملاحظه ای افزایش یافت.

در این تحقیق، پروتئاز تولیدی از سویه استرپتومایسس پیلوسوس نیز بوسیله روش لوری (Lowry) اندازه گیری شد و اثر روی بصورت ZnSO4.7H2Oو آهن بصورت FeSO4.7H2O نیز بررسی گردید و مشاهده شد که افزایش غلظت روی، سبب افزایش پروتئاز تولیدی، از سویه مذکور گردید.

مقدمه:

چه قدر زیبا و شاعرانه است که انسان به نوای دلنواز عاشقانه‌ای که در دل موجودات زنده نواخته می شود گوش دهد. تمام پدیده های هستی که زائیده اراده و مشیت الهی هستند منظر شناخت خداوند قادرند و چه با شکوه است علمی که انسان طالب معرفت را به سرچشمه شناخت این پدیده ها راهنمایی کند.

امروزه عرصه ای از حیات بشری را نمی توان یافت که تأثیر مثبت از بیوتکنولوژی نداشته باشد. کلمه بیوتکنولوژی که از دو بخش بیو (به معنی زندگی و موجودات زنده) و تکنولوژی (به معنای هنر بشر در استفاده از علم) تشکیل شده است [10] بطور کلی بیوتکنولوژی به مفهوم استفاده از موجودات زنده، اندام ها و سلولهای آنها برای تولید یک فرآورده با خدمات با ارزش اقتصادی به منظور بهبودرفاه بشر می باشد. [10] بعبارت دیگر بیوتکنولوژی دانشی است که در رابطه با استفاده از موجودات و متابولیتهای آنها جهت تولید فرآورده های مختلف دارویی، غذایی، شیمیایی و غیره در مقیاس صنعتی بحث می کند. [14]

سرآغاز بیوتکنولوژی به ده هزار سال پیش برمی گردد. [10] روند تکاملی بیوتکنولوژی در طی هزاران سال شکل گرفته است، ولی بیوتکنولوژی مدرن در اواسط دهه 70 متولد شد. [14] از همان آغاز، بیوتکنولوژی در قالب مهندسی شیمی توسعه یافت، از این رو با توسعه ی فرآیندهای صنعتی، گستردگی بیشتری پیدا کرد. [14) بیوتکنولوژی از تکنیکهای مختلف ژنتیک، میکروبیولوژی کاربردی، شیمی، بیو شیمی، بیو لوژی، مهندسی فرآیند و غیره تشکیل می‌شود.[14]

ابزار توانمند بیوتکنولوژی در پزشکی، کشاورزی، حفاظت از محیط زیست انقلاب عظیمی را بوجود آورد و امیدی برای حل بسیاری از مشکلات حاد بشر در سده بیست و یکم است. [10]

بیوتکنولوژی علمی است که بهترین راه برای یافتن علت بیماری ها و درمان آنها مورد استفاده قرار می‌گیرد بطوری که در زمینه بهداشت تحولی عظیم ایجاد کرده است. [10] انتقال وبیان ژنهای موجودات زنده و نوترکیبی آنها در آزمایشگاه به تولید محصولاتی که در پیشگیری و تشخیص و درمان بیماری ها کاربرد دارند از مهمترین عرصه های بکارگیری این دانش در توسعه ارتقاء سلامت و بهداشت جامعه و کنترل بیماری های عفونی و غیر عفونی می باشد. تشخیص دقیق و سریعتر بیماریها از جمله ناهنجاریهای ژنتیک و غربالگری از آنها، تشخیص پیش از تولد،استفاده از سلولهای بنیادین و سلولهای پایه و جنینی در مطالعات پایه و کاربردی پزشکی، تولید داروهای نوترکیب، تشخیص هویت، xenotransplantationبا استفاده از حیوانات برای تولید بافت و اندام های مورد نیاز انسان، ژن درمانی و درمان بسیاری از بیماریهای صعب العلاج و تولید پروبیوتیک ها، بهبود کیفیت مواد غذایی و از همه مهم تر درک فرآیندهای زیستی عوامل بیماری زا، مکانیزم عمل آنها و تدبیر راهبردهای جدید بهداشت و درمان، تنها تعدادی از کارهای بیوتکنولوژی در عرصه بهداشت و پزشکی است.

ای رسول گرامی قرآن را به نام پروردگارت که خدای آفریننده عالم است بر خلق قرائت کن [1] آن خدائی که آدمی را از خون بسته بیافرید [2] بخوان قرآن را و پروردگارت کریمترین کریمان عالم است [3] آن خدایی که بشر را علم نوشتن بقلم آموخت [4] و به آدم آنچه را که نمی دانست به الهام خود تعلیم داد[5]

این کلام الهی در کمال ایجاز و اختصار اشاره به تمامی علوم از جمله بیوتکنولوژی دارد، چنانچه در آیه دوم سوره علق، علق (خون بسته) بیانگر سلولهای بنیادی می باشد و خدا در آیه عَلَّمَ الْأِنسانَ مالَمْ یَعْلَمْ ( و به آدم آنچه را که نمی دانست به الهام خود تعلیم داد) بیان داشته است که در کلام قرآن علوم مختلف به انسان الهام و تعلیم داده شده است و همانطور که خداوند بارها تاکید بر تفکر و تعقل در قرآن فرموده است می توان با استعانت از آیات الهی بر بسیاری از علوم فائق آمد.

یقیناً افق روشنتر، در گرو استفاده از ارگانیسمهایی است که بطور ژنتیکی برای تولید فراورده های غیر میکروبی مانند انسولین، اینترفرون، هورمون رشد انسان، واکسنهای ویروسی مهندسی شده اند. [14] چنانچه به تازگی داروی نوترکیب انسانی (Human recombinent) γ اینترفرون به دست توانای دانشمندان ایرانی ساخته شد و ایران سومین کشور بعد از آمریکا و آلمان در تولید این فرآورده بیوتکنولوژی می‌باشد.

پس از تولید انسولین انسانی برای درمان دیابت، بیوتکنولوژی همچنان به خلق داروهای جدید و واکسن ها ادامه داده است. این داروها به میلیونها انسانی که در سرتاسر جهان به بیماریهای قلبی، سرطان، دیابت، پارکینسون، آلزایمر، ایدزو.... مبتلا هستند، کمک کرده اند. [10]

طی سالهای 1925 تا 1965 استفاده از میکروبها در صنایع دارویی بصورت یک تحول اساسی، زمینه را برای بکارگرفتن میکروارگانیسم ها در تولید آنتی‌بیوتیک ها، هورمونها، ویتامینها، داروها و غیره فراهم ساخت. همگام با توسعه آنتی بیوتیک های جدید، تولید اسیدهای آمینه و نوکلئوتیدها نیز با موفقیت به انجام رسید. از زمانی که کشف گردیده بعضی از واکنشهای شیمیایی مشکل در ساخت استروئیدها، می توانند توسط میکروارگانیسم ها با راندمان بالایی انجام شوند، تولید آسان هورمونهای استروئیدی مهم در پزشکی امکان پذیر شد. علاوه بر این تعداد زیادی از فرآیندهای تولید آنزیم برای مصارف صنعتی، تجزیه ای، پزشکی نیز توسعه یافتند. مرحله برجسته‌تر پیشرفت بیوتکنولوژی، زمانی روی داد که فرایندهای تخمیری مداوم تکمیل شدند. این فرایندها اولین بار به منظور تولید غذای انسان و خوراک دام از باکتریها و مخمرها (پروتئین تک یاخته) استفاده شدند. [14]

شبیه سازی دام، تولید حیوانات ترا ریخته برای بهبود کیفیت و کمیت تولید، تولید آنزیمها، در عرصه محیط زیست، کاهش مصرف سموم شیمیایی، فروشویی معادن با استفاده از ریزساز واره ها، حتی احیای موجودات منقرض شده از جمله دستاوردهای غیر قابل انکار این فناوری هستند. [10] همچنین برای تولید سوختهای بیولوژی و پاکسازی آلودگی ها و پسماندها از آن استفاده می شود. [ 10] امروزه به لحاظ خطر کمیاب شدن نفت، تولید اتانول سوختی به کمک مواد نشاسته ای شروع شده است، و فرآیندهای میکروبی قدیمی برای ساخت استون و بوتانول از نشاسته ( در دهه 1920 و 1930 توسعه یافته اند) رونق تازه یافته است. برای تولید میکروبی سوخت ها از مواد زائد سلولزی، پتانسیل زیادی وجود دارد اما تا به امروز، این قبیل فرآیندها، هنوز در مرحله آزمایشگاهی خود باقی مانده اند. [14]

داروهایی که از طریق بیوتکنولوژی تهیه می شوند به مراتب کمتر از داروهایی که از طریق شیمیایی سنتز می‌شوند دارای اثرات زیانبار جانبی هستند همچنین بیوتکنولوژی قادر به ساخت داروهای پیچیده ای است که بطریق دیگر نمی‌توان آنها را تولید کرد. بیوتکنولوژی به ویژه با استفاده از روشهایDNAنوترکیب، نقش مهمی در تولید داروها و واکسن ها ایفا کرده است. [10]

داروی دسفرال از جمله داروهایی است که از طریق بیوتکنولوژی تهیه می شود. هم اکنون تولید صنعتی دسفری اکسامینبوسیله تخمیر سویه ای جهش یافته از استرپتومایسس پیلوسوس توسط شرکت نواریتس انجام می شود. بطوری که نمک متان سولفونات دسفری اکسامینB (فرم مزتیله دسفری اکسامین B) با نام تجاری دسفرال جهت درمان بیماران تالاسمی استفاده می گردد. [ 128]

ما امیدواریم به یاری خداوند متعال و استعانت از کتاب الهی ( قرآن کریم) و سعی و تلاش محققین کشورمان، به پیشرفت های گسترده تری در این زمینه دست یابیم و کشور عزیزمان در کلیه زمینه های علمی و فرهنگی به بالاترین پیشرفت‌ها نایل آید. و با تولید این دارو، بتوان خدمتی به بیمارانتالاسمی کشورمان که از این بیماری رنج می برند، نمود.

فهرست مطالب:

چکیده

مقدمه

فصل اول

1- تالاسمی

1-2-اتیولوژی و سبب شناسی تالاسمی

1-2-1 - خون شناسی

1-2-2- خون سازی و گلبولهای قرمز

1-3- تالاسمی و انواع آن

1-3-1 آلفا تالاسمی

1-3-2- بتا تالاسمی

1-3-2-1 بتا تالاسمی مینور(سالم ناقل)

1-3-2-2 – بتا تالاسمی ماژور( بیماری تالاسمی)

1-3-2-3-بتا تالاسمی بینابینی

1-4- تشخیص تالاسمی

1-5- درمان تالاسمی

1-6- فیزیولوژی عنصر آهن و اهمیت آن در بدن انسان

1-6-1- مسمومیت حاد آهنی

1-7- دسفرال

1-7-1- نحوه استفاده از داروی دسفرال

1-7-2-کاربردهای داروی دسفرال در پزشکی

1-7-3- عوارض ناشی از داروی دسفرال

1-7-4- اقدامات احتیاطی در مورد داروی دسفرال

1-7-5- ملاک توقف درمان بوسیله دسفرال

فصل دوم

2-1-سیدرو فورها

2-1-1- هیدروکسامات ها

2-1-2-فنولات ها یا کاتکولات ها

2-2- دسفری اکسامین ها

2- 2-1 – ساختمان دسفری اکسامین

2-2-2- دسفراکسامین بصورت آنتی اکسیدان

2-2-3 – خصوصیات فیزیکو و شیمیایی دسفراکسامین

2-2-4- مکانیسم دسفراکسامین در جلوگیری از بیماریهای با بار اضافی آهن

2-2-5- تشکیل رادیکالDFO nitroxide

2-3-دسفری اکسامین B

2-3-1- بیوسنتر دسفری اکسامین B

2-3-2- ژنهای کد کننده دسفری اکسامین B

2-4- تولید کننده های دسفری اکسامین

2-5- اهمیت آهن بر روی میکروارگانیسمها

2-6- مکانیسم عمل سیدروفورها در ارتباط با انتقال آهن به درون سلول میکروارگانیسمها

2-7- تولید، استخراج و تخلیص دسفری اکسامین B

فصل سوم

3-1- اکتینومیست ها

3-2- استرپتومایسس ها

3-2-1- پاتولوژی

3-2-2 – مرفولوژی و ساختمان

3-2-3- مشخصات کلنی

3-2-4- اسپورزایی

3-2-5- ترکیبات پوشش سلولی

3-2-6- تغذیه و فاکتورهای موثر بر رشد و خصوصیات فیزیکوشیمیایی

3-2-6-1- تغذیه

3-2-6-2- اکسیژن

3-2-6-3 - رطوبت

3-2-6-4- دما

3-2-6-5- pH

3-2-6-6- اکولوژی

3-2-6-7- بیولوژی توسعه یافته استرپتومایسس

3-2-7- انواع فرآورده های میکروبی

3-2-7-1- متابولیت های اولیه

3-2-7-2- متابولیت های ثانویه

3-2-7-2-1- آنتی بیوتیک ها

3-2-7-2-1-1- فیزیولوژی و تنظیم تولید آنتی بیوتیک

3-2-7-3- آنزیمها

3-2-7-3-1- پروتئازها

3-2-7-3-1-1- پروتئازهای اسیدی

3-2-7-3-1-1-1- رنین

3-2-7-3-1-2- پروتئازهای خنثی

3-2-7-3-1-3- پروتئاز های قلیایی

3-2-7-3-1-3-1- فرآیند تخمیر پروتئازهای قلیایی

3-2-7-3-1-3-2- تعیین فعالیت پروتئاز قلیایی

3-2-7-3-1-4- بازدارنده های فعالیت آنزیم پروتئاز وشلاته کننده ها

3-2-7-3-1-5- تجزیه

3-2-7-3-1-6- پروتئاز ها و استرپتومایسسها

3-2-8- محیط کشتتخمیر صنعتی

3-2-8-1- نیازهای غذایی میکروارگانیسم‌ها

3-2-8-1-1- کربن

3-2-8-1-1-1- منابع کربن و استرپتومایسس ها

3-2-8-1-2-نیتروژن

3-2-8-1-2-1-منابع نیتروژن و استرپتومایسس ها

3-2-8-1-3- هیدروژن و اکسی

-2-8-1-4- مواد معدنی

3-2-8-2-تنظیم کننده های متابولیکی

3-2-8-3- ضد کف ها

3-2-9- بیوسنتزدر استرپتومایسس ها

فصل چهارم

4-1- دستگاه های مورد استفاده

4-2- وسایل مورد استفاده

4-3 - محیط های کشت مایع برای رشد باکتری

4-4- محیط های کشت جامد برای رشد باکتری

4-5- محیط های جامد برای تولید اسپور

4-6- مواد لازم جهت رنگ آمیزی گرم

4-7- مواد لازم جهت استفاده از میکروسکوپ نوری

4-8- محیط مورد استفاده جهت شناسایی کیفی دسفری اکسامین: محیط Des4

4-9- محیط مورد استفاده جهت اندازه گیری تولید دسفری اکسامین محیط Soy bean  

4-10- مواد لازم جهت نگهداری و ذخیره باکتری ها

4-11- معرف های دسفری اکسامین

4-12- مواد لازم جهت رسم منحنی استاندارد دسفری اکسامین B

4-13- مواد لازم جهت استخراج دسفری اکسامین

4-14- مواد لازم جهت تهیه محلول Lysing Buffer

4-14-1 – مواد لازم جهت تهیه محلول Tris Hcl

4-15- محلول کازئین %5/0 دربافر فسفات

4-15-1- بافر فسفات (PBS)

4فصل پنجم

5 – ١- تهیه و آماده سازی سویه استرپتومایسس پیلوسوس

5 ـ ٢ ـ بررسی خصوصیات مرفولوژیکی سویه استرپتومایسس پیلوسوس

5-٢-١- خصوصیات ماکروسکوپی

5- ٢-١-١- کشت استرپتومایسس پیلوسوس بر روی محیط جامد-16- محلول لوری

5-٢-١-٢- کشت استرپتومایسس پیلوسوس در محیط مایع

5-٢-٢ خصوصیات میکروسکوپی

5-٢-٢-١- تهیه لام از محیط کشت جامد

5-٢-٢-٢- تهیه لام از محیط کشت مایع

5ـ ٢ـ٢ـ ٣ـ رنگ آمیزی گرم

5 ـ ٣ـ تهیه مایع تلقیح

5 ـ ٣ـ ١ـ تهیه محیط ذخیره

5 ـ ٣ـ ٢ـ تهیه سوسپانسیون اسپور

5ـ ٤ـ رسم منحنی رشد استرپتومایسس پیلوسوس

5ـ ٥ـ بررسی تغییراتpH در محیط کشت Soybean

5ـ ٦ـ تولید دسفری اکسامین توسط استرپتومایسس پیلوسوس

5ـ ٦ـ ١ـ تشخیص کیفی دسفری اکسامین

5ـ ٦ـ ٢ـ سنجش میزان تولید دسفری اکسامین در هر روز

5-6-3- رسم منحنی استاندارد دسفرال

5-٧ـ استخراج دسفری اکسامین بوسیله فنل-کلروفرم

5 ـ ٧ـ ١ـ مزتیله کردن دسفری اکسامین

5-8- تعیین وجود دسفری اکسامین B در ماده استخراج شده

5ـ ٩ـبهینه سازی محیط کشت تولید دسفری اکسامین

5ـ ٩ـ ١ـ بررسی اثر اسید آمینه ترئونین بر تولید دسفری اکسامین

5 ـ ٩ـ ١ـ ١ـ بررسی اثر اسید آمینه ترئونین بر تولید دسفری اکسامین در یک محدوده غلظت

5ـ ٩ـ ٢ـ بررسی اثر اسیدآمینه ترئونین و اسید آمینه لوسین و ویتامین تیامینB1)( برتولید دسفری اکسامین  

5 ـ ٩ـ ٣ـ بررسی گلوکز و ملاس و سوکروز بر تولید دسفری اکسامین

5ـ ٩ـ ٤ـ بررسی اثر شلاته کننده های کاتیون بر تولید دسفری اکسامین

5 ـ ٩ـ ٥ـاستفاده از محیط کشت عصاره مخمر به جای استفاده از محیط کشت Soybean

5 ـ ٩ـ ٦ـ بررسی اثر مواد معدنی مختلف بر میزان تولید دسفری اکسامین

5 ـ٩ـ٦ـ١ـ بررسی تاثیر مواد معدنی در غلظت های مختلف بر میزان تولید دسفری اکسامین  

5 ـ ١٠ - بررسی پروتئاز تولیدی از استرپتومایسس پیلوسوس در حضور شلاتهکننده ها و مواد معدنی مختلف

5 ـ ١٠ـ ١ـ کشت باکتری و سنجش پروتئاز

5 ـ ١٠ـ 2ـ تخلیص کازئین

فصل ششم

6ـ ١ـ بررسی خصوصیات مرفولوژیکی ماکروسکوپی استرپتومایسس پیلوسوس

6ـ ١ـ ١ ـ خصوصیات ماکروسکوپی سویه استاندارد بر روی محیط کشت جامد

6 ـ ١ـ٢ـ خصوصیات ماکروسکوپی سویه استاندارد در محیط کشت مایع

6 ـ ٢ـ بررسی خصوصیات مرفولوژیکی میکروسکوپی استرپتومایسس پیلوسوس

6 ـ٣ـ رسم منحنی رشد استرپتوماسیس پیلوسوس در محیط کشت MYB

6-4- رسم منحنی pH بر حسب زمان در محیط کشت Soybean حاوی سویه استرپتومایسس پیلوسس

6 ـ ٥ـ تشخیص کیفی و کمی دسفری اکسامین تولیدی

6-5-1- تشخیص کیفی و تولید و یا عدم تولید دسفری اکسامین

6ـ٥ـ2ـ رسم نمودار استاندارد دسفرال

6ـ٥ـ3ـ میزان دسفری اکسامین تولیدی در هر روز توسط سویه استرپتومایسس پیلوسوس در محیط Soy bean

6-6- نتایج مربوط به استخراج دسفری اکسامین تولید شده توسط سویه استرپتومایسس پیلوسوس

6-6-1- نتایج مربوط به تأیید وجود دسفری اکسامین B در ماده استخراج شده

6-7-بهینه سازی محیط کشت تولید دسفری اکسامین

6-7-1بررسی اثر اسید آمینه ترئونین بر تولید دسفری اکسامین

6-7-1-1- بررسی اثر اسید آمینه ترئونین بر تولید دسفری اکسامین در یک محدوده غلظت

6ـ7ـ ٢ـ بررسی اثر اسید آمینه های ترئونین و لوسین و ویتامین تیامین (B1 )

6 ـ 7ـ٣ـ بررسی گلوکز ، ملاس، سوکروز بر تولید دسفری اکسامین

6ـ 7ـ ٤ـ بررسی اثر شلاته کننده های کاتیون بر میزان تولید دسفری اکسامین

6ـ 7ـ ٥ـ استفاده از محیط کشت عصاره مخمر به جای استفاده از محیط کشت Soybean

6 ـ 7ـ ٦ـ بررسی اثر مواد معدنی مختلف بر میزان تولید دسفری اکسامین

6 – 7 – 6 – 1 – بررسی اثر مواد مختلف با غلظت متفاوت بر میزان تولید دسفری اکسامین

6ـ8ـ بررسی پروتئاز تولیدی از استرپتومایسس پیلوسوس در حضور شلاته‌کننده و مواد معدنی مختلف

فصل هفتم

بحث و نتیجه گیری

پیشنهادات

فهرست منابع

منابع ومأخذ:

استفن جی، اولیور – جان ام. وارد؛ فرهنگ مهندسی ژنتیک؛ ترجمه: دکتر محمدرضا نوری دلویی، دکتر سامیه خسروی نیا، فرهت مجید فر، 1373؛ انتشارات مرکز ملی تحقیقات مهندسی ژنتیک و تکنولوژی زیستی؛ ص. 21

درگاهی حسین (1376) ؛ درمان با تزریق خون در سندرمهای تالاسمی؛ تالاسمی (دو فصلنامۀ انجمن تالاسمی ایران)؛ شمارۀ 11: صص 18-11.

نصیری طوسی محسن و همکاران (1376)؛ گزارش وضعیت کودکان و نوجوانان تالاسمی ماژور در ایران، بهار 1376؛ تالاسمی (دو فصلنامۀ انجمن تالاسمی ایران) ؛ شمارۀ 12: صص 27-25.

باوریان روشنک: بررسی تکنیک پروتوپلاست فیوژن در تولید آنتی بیوتیک نیستاتین؛ پایان نامه دکترای داروسازی از دانشکده داروسازی دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی – درمانی شهید بهشتی؛ شمارۀ 333؛ سال تحصیلی 76-1375.

درخشان، سیامک – باقرزاده، محمد حسین (مترجمین) اصول طب داخلی هاریسون 91 بیماریهای خون و لنفومها – انتشارات چهر ص 195 تا 216 سال (1370)

ملک زاده شهرام (مترجم) پاتوفیزیولو‍ژی خون و ارگانهای خونساز، مؤلف اسمیت تایر ص 41 تا 225 انتشارات میقات سال (1369)

بداغی مصباح الدین، فیروزه ای محسن، کوچک شلمانی اسماعیل (مترجمین) مروری بر بیوشیمی هارپر (جلد اول) چاپ سوم ص 101 تا 120 ناشر جهاد دانشگاهی سال (1369)

اطلاعات و کاربرد بالینی داروهای ژنریک ایران ص 432 سال ناشر شرکت سهامی داروپخش سال (1369)0

ملک زاده، ف. و همکاران، بیوتکنولوژی ملکولی، انتشارات دانشگاه تهران، ص 113-112، 39-36، 22-13.

دکتر صنعتی، محمد حسین –اسمعیل زاده، نسرین سادات ؛ 1380؛ بیوتکنولوژی راهگشای مشکلات بشری در سده بیست و یکم؛ تهران: مرکز ملی تحقیقات ژنتیک و تکنولوژی زیستی؛ صص 23 – 2.

افسری نژاد، مینا –سپهر، شایسته ؛ 1371؛ میکروبیولوژی عمومی؛ انتشارات دانشگاه پیام نور؛ ص 466.

سازمان جهانی بهداشت (WHO)؛ تهیه کننده: وزارت بهداشت و درمان آموزش پزشکی معاونت سلامت؛ دستور العمل جامع متون آموزش برنامه کشوری پیشگیری از بروز بتا تالاسمی ماژور؛ سال 1383؛ ناشر: مرکز نشر صدا تهران.

دکتر شجاع الساداتی، عباس-با همکاری مهندس اسد اللهی، عباس؛ بیوتکنولوژی صنعتی؛ 1381؛ دفتر نشر آثار دانشگاه تربیت مدرس؛ صص 53 – 34.

کروگر، ولف – کروگر، آنالز – ترجمه: دکتر سید علی مرتضوی، مهندس رسول کدخدایی، مهندس مهدی کریمی، مهندس سعید رحیمی یزدی؛ بهار 1376؛ بیوتکنولوژی، میکروبیولوژی صنعتی، انتشارات دانشگاه فردوسی مشهد.

Kunamneni Adinarayana, poluri Ellaiah, and Davuluri Siva Prasad purficatin and Characterization of Thermostable serine Alkaline protease from a Newly Isolated Bacillus subtilis PE – 11; 2003.

Francisco Barana – Gomez, T. Sylvie Lautru, Francois – XavierFrancou, Pierre Leblond, Jean – Luc Pernodet and Gregory L. Challis. Multiple biosynthetic and uptake systems mediate siderophore dependent iron acquisistion in streptomyces coelicolor A3(2) and Streptomyces ambofaciens ATCC 23877.

Abbas A. & Edwards C. (1989) ; Effects of metals on a range of Streptomyces species ; Appl. Environ. Microbiol. ; 55 (8): 2030-2035.

Atlas R.M. & Park L.C. (1993); Handbook of microbiological media ; CRC Press ; p. 461

Bagg A. & Neilands J.B (1987) ; Molecular mechanism of regulation of siderophormediated Iron assimilation ; Microbiol. Rev. ; 51 (4): 509-518

Baltz R.H. , Hann D.R. , McHenny M.A. & Solenberg P.J. (1992) ; Transposition of Tn5096 and related transposon in Strptoomyces spices ; Gene ; 115: 61 -65

Baron E.J. & Finegold S.M. (1990) ; Diagnostic Microbiology ; Mosby

Bradley S. G. & Ritzi D. (1968) ; Streptomycetes ultrastructure; J. Bacteriol. ; 95: 2358-2364

Brock T.D. & Madigan M.T. (1991) ; The Bacteria ; In: Biology of Microorganisms ; 6th. ed. ; Prentice – Hall International Inc. ; New Jersey ; pp. 782-790

Budavari S. (1989) ; Merck Index ; 11 th. ed. ; Mercksharp and Dohme Research Lab. ; New Jersey.

Chart H. ; Buck M. ; Stevenson P. & Griffiths E. (1986) ; Iron regulated outer membrane protein of E. coli: Variation in expression due to the chelator used to restrict the availability of Iron ; J. Gen. Microbiol. ; 1373-1378.

Collado – Vides J. , Magasanik B. & Gralla J.D. (1991) ; Control site location and transcriptional regulation in E. coli ; Microbiol. Rev. ; 55 (3): 371 – 394

Davis B.D. ; Dulbecco R. ; Eisen H.N. & Gimberg H.S. (1990) ; Microbiology ; 4 th. ed. ; J.B. Lippincott Company ; p. 68

DeJong P.J. & McCoy E. (1966) ; Qualititative analyses of vegetative cell walls and spore walls of some representative species of Streptomyces ; Can. J. Micro – boil. ; 12(5): 985-994

Dykstra M.J. (1993) ; A Manual of Applied Techniques for Biological Electron Microscopy ; Plenum Press.

Ensign J.C. (1978) ; Formation, properties and germination of Actinomycetes spores ; Annual Rev. Microbiol. ; 32: 185-219

Gaeumann E.

اختصاصی از هایدی تجزیه زیستی تولوئن و بنزن به وسیله ی باکتری استرپتومایسس جدا شده ازخاک آذربایجان شرقی درمقیاس آزمایشگاهی دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

تجزیه زیستی تولوئن و بنزن به وسیله ی باکتری استرپتومایسس جدا شده ازخاک آذربایجان شرقی درمقیاس آزمایشگاهی

نویسند‌گان:

[ نجیبه شیرزاد ] - دانشجوی کارشناسی ارشد گروه مهندسی شیمی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد اهر،

[ علی فرضی ] - استادیار، دانشگاه تبریز، گروه مهندسی شیمی و نفت،

[ علیرضا دهناد ] - استادیار، مرکز تحقیقات کشاورزی و منابع طبیعی آذربایجان شرقی

[ نادر حاجی زاده ] - کارشناسی ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه آزاداسلامی، واحدایلخچی، باشگاه پژوهشگرانجوان ونخبگان، ایلخچی، ایران

خلاصه مقاله:

هیدروکربنهای آروماتیک جزو آلایندههای نفتی می باشند که در ساختمان آنها حلقههای بنزنی بهکار رفته است. این مواد ازمنابع مختلف شامل صنایع پتروشیمی، فاضلابهای صنعتی و خانگی، استخراج مواد نفتی، داروسازی، رنگ، پلاستیک، حشره کش و غیرهوارد اکوسیستمهای آب و خاک می شوند. کیفیت خاک و قابلیت رشد گیاهان در آن را مختل می کنند و به طور مستقیم به انسان منتقل و عوارضی از جمله سرطان را سبب میشوند. برخلاف بسیاری از روشهای متداول که مشکل آلودگی را صرفاً به گونهای دیگر تبدیل میکنند و یا آلاینده را به بستر دیگری منتقل میکنند، پالایش زیستی با صرف کمترین هزینه، توانایی حذف دائم آلایندهها یاتبدیل آنها به مواد بیخطر را دارد. دراین تحقیق 5 گونه باکتری استرپتومایسس جدا شده از خاک آذربایجان شرقی برای تجزیه تولوئن و بنزن موجود درخاک آلوده به مواد نفتی بررسی شد. بهترین گونه که بالاترین عملکرد را داشت، برای تجزیه تولوئن و بنزن انتخاب شد. برای انجام آزمایش از محیط کشت معدنی استفاده شد. به یکی از محیط ها علاوه بر تولوئن و بنزن، باکتری نیز افزوده شد که با مقایسهآن با محیط کشت معدنی حاوی منحصرا تولوئن و بنزن )محیط شاهد( تغییرات حاصل از تاثیر باکتری بررسی گردید. توانایی باکتری هابرای تجزیه تولوئن و بنزن با استفاده از حداکثر طول موج توسط دستگاه اسپکتروفتومتر تعیین شد. نتایج نشان داد که باکتری استرپتومایسس گونه ی g2 می تواند بنزن و تولوئن را بیش از 01 % تجزیه کند و نقش مهمی در تجزیه زیستی و پاکسازی خاک های آلوده هیدروکربنی داشته باشد

 

کلمات کلیدی:

تجزیه زیستی، بنزن، تولوئن، استرپتومایسس

 

ارزیابی میزان تولید داروی دسفرال از سویه استرپتومایسس پیلوسوس به روش بیولوژیک

اختصاصی از هایدی ارزیابی میزان تولید داروی دسفرال از سویه استرپتومایسس پیلوسوس به روش بیولوژیک دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

لینک پرداخت و دانلود *پایین مطلب*

فرمت فایل:Word (قابل ویرایش و آماده پرینت)

تعداد صفحه176

عنوان                                                صفحه

چکیده................................................ 1

مقدمه................................................ 3

فصل اول

1-1 - تالاسمی......................................... 8

1-2-اتیولوژی و سبب شناسی تالاسمی...................... 8

1-2-1 - خون شناسی.................................... 9

1-2-2- خون سازی و گلبولهای قرمز..................... 10

1-3- تالاسمی و انواع آن.............................. 10

1-3-1 آلفا تالاسمی................................... 10

1-3-2- بتا تالاسمی................................... 11

1-3-2-1 بتا تالاسمی مینور(سالم ناقل)................. 11

1-3-2-2 – بتا تالاسمی ماژور( بیماری تالاسمی).......... 12

1-3-2-3-بتا تالاسمی بینابینی......................... 13

1-4- تشخیص تالاسمی................................... 13

1-5- درمان تالاسمی................................... 13

1-6- فیزیولوژی عنصر آهن و اهمیت آن در بدن انسان..... 14

1-6-1- مسمومیت حاد آهنی............................. 15

1-7- دسفرال......................................... 16

1-7-1- نحوه استفاده از داروی دسفرال................. 17

1-7-2-کاربردهای داروی دسفرال در پزشکی............... 18

1-7-3- عوارض ناشی از داروی دسفرال................... 19

1-7-4- اقدامات احتیاطی در مورد داروی دسفرال......... 19

1-7-5- ملاک توقف درمان بوسیله دسفرال................. 20

فصل دوم

2-1-  سیدرو فورها................................... 22

2-1-1- هیدروکسامات ها............................... 24

2-1-2-فنولات ها یا کاتکولات ها........................ 25

2-2- دسفری اکسامین ها............................... 26

2- 2-1 – ساختمان دسفری اکسامین...................... 28

2-2-2- دسفراکسامین بصورت آنتی اکسیدان............... 28

2-2-3 – خصوصیات فیزیکو و شیمیایی دسفراکسامین........ 29

2-2-4- مکانیسم دسفراکسامین در جلوگیری از بیماریهای با بار اضافی آهن.................................................... 29

2-2-5- تشکیل رادیکال  DFO nitroxide.................... 30

2-3-  دسفری اکسامین B............................... 31

2-3-1- بیوسنتر دسفری اکسامین B...................... 33

2-3-2- ژنهای کد کننده دسفری اکسامین B............... 33

2-4- تولید کننده­های دسفری اکسامین................... 34

2-5- اهمیت آهن بر روی میکروارگانیسمها............... 35

2-6- مکانیسم عمل سیدروفورها در ارتباط با انتقال آهن به درون سلول میکروارگانیسمها..................................... 36

2-7- تولید، استخراج و تخلیص دسفری اکسامین B......... 37

فصل سوم

3-1- اکتینومیست ها.................................. 40

3-2- استرپتومایسس ها................................ 43

3-2-1- پاتولوژی..................................... 43

3-2-2 – مرفولوژی و ساختمان.......................... 43

3-2-3- مشخصات کلنی................................. 454

3-2-4- اسپورزایی.................................... 47

3-2-5- ترکیبات پوشش سلولی........................... 49

3-2-6- تغذیه و فاکتورهای موثر بر رشد و خصوصیات فیزیکوشیمیایی 49

3-2-6-1- تغذیه...................................... 49

3-2-6-2- اکسیژن..................................... 50

3-2-6-3 - رطوبت..................................... 50

3-2-6-4- دما........................................ 51

3-2-6-5- pH......................................... 51

3-2-6-6- اکولوژی.................................... 52

3-2-6-7- بیولوژی توسعه یافته استرپتومایسس........... 53

3-2-7- انواع فرآورده های میکروبی.................... 56

3-2-7-1- متابولیت های اولیه......................... 56

3-2-7-2- متابولیت های ثانویه........................ 56

3-2-7-2-1- آنتی بیوتیک ها........................... 58

3-2-7-2-1-1- فیزیولوژی و تنظیم تولید آنتی بیوتیک.... 58

3-2-7-3- آنزیمها.................................... 63

3-2-7-3-1- پروتئازها................................ 63

3-2-7-3-1-1- پروتئازهای اسیدی....................... 67

3-2-7-3-1-1-1- رنین................................. 67

3-2-7-3-1-2- پروتئازهای خنثی........................ 67

3-2-7-3-1-3- پروتئاز های قلیایی..................... 67

3-2-7-3-1-3-1- فرآیند تخمیر پروتئازهای قلیایی....... 68

3-2-7-3-1-3-2- تعیین فعالیت پروتئاز قلیایی.......... 69

3-2-7-3-1-4- بازدارنده های فعالیت آنزیم پروتئاز وشلاته کننده ها   69

3-2-7-3-1-5- تجزیه.................................. 71

3-2-7-3-1-6- پروتئاز ها و استرپتومایسسها............ 71

3-2-8- محیط کشت  تخمیر صنعتی........................ 71

3-2-8-1- نیازهای غذایی میکروارگانیسم‌ها.............. 71

3-2-8-1-1- کربن..................................... 74

3-2-8-1-1-1- منابع کربن و استرپتومایسس ها........... 77

3-2-8-1-2-نیتروژن................................... 78

3-2-8-1-2-1-  منابع نیتروژن و استرپتومایسس ها....... 80

3-2-8-1-3- هیدروژن و اکسیژن......................... 80

3-2-8-1-4- مواد معدنی............................... 80

3-2-8-2-تنظیم کننده های متابولیکی................... 81

3-2-8-3- ضد کف ها................................... 82

3-2-9- بیوسنتز  در استرپتومایسس ها.................. 83

فصل چهارم

4-1- دستگاه های مورد استفاده........................ 86

4-2- وسایل مورد استفاده............................. 86

4-3 - محیط های کشت مایع برای رشد باکتری............. 88

4-4- محیط های کشت جامد برای رشد باکتری.............. 89

4-5- محیط های جامد برای تولید اسپور................. 89

4-6- مواد لازم جهت رنگ آمیزی گرم..................... 90

4-7- مواد لازم جهت استفاده از میکروسکوپ نوری......... 91

4-8- محیط مورد استفاده جهت شناسایی کیفی دسفری اکسامین: محیط Des4  91

4-9- محیط مورد استفاده جهت اندازه گیری تولید دسفری اکسامین محیط Soy bean ................................................ 91

4-10- مواد لازم جهت نگهداری و ذخیره باکتری ها........ 92

4-11- معرف های دسفری اکسامین........................ 92

4-12- مواد لازم جهت رسم منحنی استاندارد دسفری اکسامین B 92

4-13- مواد لازم جهت استخراج دسفری اکسامین............ 92

4-14- مواد لازم جهت تهیه محلول Lysing Buffer............ 93

4-14-1 – مواد لازم جهت تهیه محلول Tris Hcl............. 93

4-15- محلول کازئین %5/0 دربافر فسفات................ 93

4-15-1- بافر فسفات (PBS)............................. 93

4-16- محلول لوری (Lowry)............................. 93

فصل پنجم

5 – ١- تهیه و آماده سازی سویه استرپتومایسس پیلوسوس.. 98

5 ـ ٢ ـ بررسی خصوصیات مرفولوژیکی سویه استرپتومایسس پیلوسوس   98

5-٢-١- خصوصیات ماکروسکوپی........................... 99

5- ٢-١-١- کشت استرپتومایسس پیلوسوس بر روی محیط جامد. 99

5-٢-١-٢- کشت استرپتومایسس پیلوسوس در محیط مایع...... 99

5-٢-٢ خصوصیات میکروسکوپی............................ 99

5-٢-٢-١- تهیه لام از محیط کشت جامد................... 99

5-٢-٢-٢- تهیه لام از محیط کشت مایع.................. 100

5ـ ٢ـ٢ـ ٣ـ رنگ آمیزی گرم........................... 100

5 ـ ٣ـ تهیه مایع تلقیح............................. 100

5 ـ ٣ـ ١ـ تهیه محیط ذخیره.......................... 101

5 ـ ٣ـ ٢ـ تهیه سوسپانسیون اسپور.................... 101

5ـ ٤ـ رسم منحنی رشد استرپتومایسس پیلوسوس........... 101

5ـ ٥ـ بررسی تغییرات  pH در محیط کشت Soybean......... 102

5ـ ٦ـ تولید دسفری اکسامین توسط استرپتومایسس پیلوسوس 102

5ـ ٦ـ ١ـ تشخیص کیفی دسفری اکسامین.................. 102

5ـ ٦ـ ٢ـ سنجش میزان تولید دسفری اکسامین در هر روز.. 103

5-6-3- رسم منحنی استاندارد دسفرال.................. 103

5-٧ـ استخراج دسفری اکسامین بوسیله فنل-کلروفرم...... 104

 5 ـ ٧ـ ١ـ مزتیله کردن دسفری اکسامین............... 105

5-8- تعیین وجود دسفری اکسامین B در ماده استخراج شده 105

5ـ ٩ـ  بهینه سازی محیط کشت تولید دسفری اکسامین..... 107

5ـ ٩ـ ١ـ بررسی اثر اسید آمینه ترئونین بر تولید دسفری اکسامین 107

5 ـ ٩ـ ١ـ ١ـ بررسی اثر اسید آمینه ترئونین بر تولید دسفری اکسامین در یک محدوده غلظت..................................... 107

5ـ ٩ـ ٢ـ بررسی اثر اسیدآمینه ترئونین و اسید آمینه لوسین و ویتامین تیامینB1)  ( برتولید دسفری اکسامین .................. 108

5 ـ ٩ـ ٣ـ بررسی گلوکز و ملاس و سوکروز بر تولید دسفری اکسامین  108

5ـ ٩ـ ٤ـ بررسی اثر شلاته کننده های کاتیون بر تولید دسفری اکسامین................................................... 108

5 ـ ٩ـ ٥ـ  استفاده از محیط کشت عصاره مخمر به جای استفاده از محیط کشت Soybean............................................. 109

5 ـ ٩ـ ٦ـ بررسی اثر مواد معدنی مختلف بر میزان تولید دسفری اکسامین................................................... 109

5 ـ٩ـ٦ـ١ـ بررسی تاثیر مواد معدنی در غلظت های مختلف بر میزان تولید دسفری اکسامین...................................... 111

5 ـ ١٠ - بررسی پروتئاز تولیدی از استرپتومایسس پیلوسوس در حضور شلاته  کننده ها و مواد معدنی مختلف........................ 112

5 ـ ١٠ـ ١ـ کشت باکتری و سنجش پروتئاز............... 112

5 ـ ١٠ـ 2ـ تخلیص کازئین............................ 113

فصل ششم

6ـ ١ـ بررسی خصوصیات مرفولوژیکی ماکروسکوپی استرپتومایسس پیلوسوس................................................... 115

6ـ ١ـ ١­ـ خصوصیات ماکروسکوپی سویه استاندارد بر روی محیط کشت جامد................................................... 115

6 ـ ١ـ٢ـ خصوصیات ماکروسکوپی سویه استاندارد در محیط کشت مایع  115

6 ـ ٢ـ بررسی خصوصیات مرفولوژیکی میکروسکوپی استرپتومایسس پیلوسوس................................................... 116

6 ـ٣ـ رسم منحنی رشد استرپتوماسیس پیلوسوس در محیط کشت MYB    116

6-4- رسم منحنی pH بر حسب زمان در محیط کشت Soybean حاوی سویه استرپتومایسس پیلوسس................................ 118

6 ـ ٥ـ تشخیص کیفی و کمی دسفری اکسامین تولیدی....... 120

6-5-1- تشخیص کیفی و تولید و یا عدم تولید دسفری اکسامین 120

6ـ٥ـ2ـ رسم نمودار استاندارد دسفرال................. 120

6ـ٥ـ3ـ میزان دسفری اکسامین تولیدی در هر روز توسط سویه استرپتومایسس پیلوسوس در محیط Soy bean............... 121

6-6- نتایج مربوط به استخراج دسفری اکسامین تولید شده توسط سویه استرپتومایسس پیلوسوس............................... 122

6-6-1- نتایج مربوط به تأیید وجود دسفری اکسامین B در ماده استخراج شده................................................ 122

6-7-  بهینه سازی محیط کشت تولید دسفری اکسامین...... 124

6-7-1  بررسی اثر اسید آمینه ترئونین بر تولید دسفری اکسامین   124

6-7-1-1- بررسی اثر اسید آمینه ترئونین بر تولید دسفری اکسامین در یک محدوده غلظت........................................ 124

6ـ7ـ ٢ـ بررسی اثر اسید آمینه های ترئونین و لوسین و ویتامین تیامین (B1 ).............................................. 126

6 ـ 7ـ٣ـ بررسی گلوکز ، ملاس، سوکروز بر تولید دسفری اکسامین    126

6ـ 7ـ ٤ـ بررسی اثر شلاته کننده های کاتیون بر میزان تولید دسفری اکسامین............................................ 127

6ـ 7ـ ٥ـ استفاده از محیط کشت عصاره مخمر به جای استفاده از محیط کشت Soybean............................................. 128

6 ـ 7ـ ٦ـ بررسی اثر مواد معدنی مختلف بر میزان تولید دسفری اکسامین................................................... 128

6 – 7 – 6 – 1 – بررسی اثر مواد مختلف با غلظت متفاوت بر میزان تولید دسفری اکسامین ............................... 130